ELISA sa lošim rezultatom?Pratite nas da odaberete pravi Elisa tanjir.
Odabir odgovarajuće ELISA ploče je prvi korak do uspješnog ELISA eksperimenta, ali mnogi ljudi to ignoriraju. Kada ljudi rade eksperimente, često uzimaju u obzir samo eksperiment, ali ne znaju da proizvod često ima veliki utjecaj na eksperiment. Pravilan odabir proizvoda doprinijet će uspjehu eksperimenta. Obično uzimamo u obzir sljedeće faktore kada provodimo ELISA eksperimente:
1. Oblik dna
Trenutno, proizvođači dizajniraju enzimom označene jažice kao nezavisne kolone i na odgovarajući način povećavaju razmak između jažica tako da se mogu odvojiti nezavisno, čime se minimizira unakrsna kontaminacija. Različite vrste Elisa ploča imaju različite oblike dna bunara. Evo nekih uobičajenih oblika dna rupa:
Ravno dno: Dno je horizontalno, takođe se zove F dno. Svjetlost se neće odbijati kroz dno, koje može prenijeti svjetlost u najvećoj mjeri. Koristite za eksperimente koji zahtijevaju okruglo dno zbog vidljivosti ili drugih razloga.
Okruglo dno: poznato i kao U-dno, pruža najbolje rezultate čišćenja i hibridne performanse, pogodno za aplikacije koje trebaju testirati sedimente.
C-dno: Može pružiti dobar učinak čišćenja između ravnog dna i okruglog dna, kombinirajući prednosti ravnog dna.
Konusno dno: poznato i kao V-dno, pogodno je za precizno uzorkovanje i skladištenje mikro uzoraka za optimalan oporavak malih količina.
2. Boja Elisa tanjira
Postoje tri boje Elisa tanjira: prozirna, crna i bijela.
Većina ELISA testova bira prozirne ploče kao eksperimentalne materijale. Bijele i crne Elisa ploče se općenito koriste za detekciju luminiscencije. Sama crna ELISA ploča apsorbira svjetlost, tako da je njen signal slabiji od signala bijele ELISA ploče. Crne Elisa ploče se općenito koriste za detekciju jače svjetlosti, kao što je detekcija fluorescencije; naprotiv, bijele Elisa ploče se mogu koristiti za slabiju detekciju svjetlosti i često se koriste za opću hemiluminiscenciju i razvoj boje supstrata (kao što je dualna luciferaza). analiza reporterskih gena).
3. Materijal Elisa ploče
Uobičajeni materijali su polietilen (PE), polipropilen (PP), polistiren (PS), polivinil hlorid (PVC) i polikarbonat (PC).
Najrasprostranjeniji materijali u ELSIA-i su polistiren i polivinil hlorid. Polivinilhlorid mekana ploča je tanka, može se rezati, a cijena je niska. Nedostatak je što završna obrada nije tako dobra kao polistirenska ploča, a dno rupe nije tako ravno kao polistiren. Ali će se i odgovarajuća pozadinska vrijednost povećati. Obično se tretman ionskim presađivanjem izvodi na površini ELISA ploče, a aktivne funkcionalne grupe kao što su aldehidne grupe, amino grupe i epoksi grupe se uvode u površinu polimera kako bi se poboljšale performanse površine supstrata.
4. različiti mehanizmi vezivanja
Efikasno vezivanje materijala za oblaganje za donju površinu ploče je ključni korak u ELISA testu. Stoga, strukturne karakteristike i hemijska svojstva supstance koja se oblaže treba pažljivo analizirati prije eksperimenta kako bi se odabrala odgovarajuća Elisa ploča. Uopšteno govoreći, postoji nekoliko načina vezivanja materijala za oblaganje za dno ploče: pasivna adsorpcija, kovalentno vezivanje i hvatanje afiniteta.
Pasivna Adsorpcija: Mehanizam pasivne adsorpcije je složen, a vezivanje između materijala prevlake i dna ploče uglavnom se oslanja na intermolekularne sile (van der Waalsova sila) i vodikove veze. U većini ELISA testova, vezivanje supstance za oblaganje na dno ploče se postiže pasivnom adsorpcijom. Općenito, vezivanje između antigena srednje i velike molekularne težine (ili antitijela) i dna ploče se postiže pasivnom adsorpcijom. Hidrofobne/hidrofilne karakteristike donje površine ploče često se uzimaju u obzir pri odabiru Elisa ploče. Sljedeća tabela navodi opseg primjene i upotrebe različitih hidrofilnih podloga:
hidrofilna | Prioritetno uvezivanje | Glavna upotreba |
- | Molekule koje sadrže značajne hidrofobne regije, kao što su: lipidi, lipoproteini, veliki proteini | Antigen ELISA, FlA, LIA |
plus | Biomolekule sa hidrofilnim/hidrofobnim svojstvima kao što su: srednji do veliki proteini, imunoglobulini, albumin | Dvostruka antitela sendvič ELISA, antigen ELISA |
plus plus | Biomolekule sa hidrofilnim/hidrofobnim svojstvima kao što su: mali do veliki proteini, imunoglobulini, albumin, LPS, fosforilirani proteini, glikoproteini | Dvostruka antitela ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glikoproteini, polarne molekule lipida, fosfolipidi, kardiolipidi | Antigen ELISA |
Afinitetno hvatanje: Afinitetno hvatanje se zasniva na specifičnom vezivanju obeleženih makromolekula za njihove odgovarajuće receptore. Označeni makromolekuli se mogu dobiti ili hemijskim spajanjem ili genetskim inženjeringom.
Karakteristike Affinity Capture su:
1.visoka specifičnost
2. Može poboljšati omjer signal-šum rezultata mjerenja
Češće površine dna bunara su: površina obložena streptavidinom (streptavidin); površina presvučena nikl kelatom (Nickel Chelate) i površina presvučena glutationom (Glutation, GSH).
3. Površina streptavidina: Visok afinitet i specifičnost streptavidina i biotina se koriste za ostvarivanje vezivanja donje ploče za obloženi protein.
4. Površina helata nikla: nikl kelat je vezan za površinu polimera kako bi se vezali fuzioni proteini sa His (histidinskim) oznakama.
5. Površina glutationa: Upotreba specifičnosti enzima i supstrata između glutationa i glutation sulfhidriltransferaze (GST) za postizanje vezivanja donje ploče za protein omotača.
Zašto odabrati BKMAM Elisa ploču?
Napravljen od 100 posto polistirenskog materijala,
Pogodno za adherentnu ćelijsku kulturu,
Ravna baza, ujednačena debljina i ujednačena veličina za reakcione polove,
Sterilno sa individualnim pakovanjem,
Visok kvalitet sa fabričkom cijenom.
